1、什么样的进口血清最适合培养细胞?
血清的选择:
血清含有生长因子可促进细胞的繁殖,含有附着因子可促进细胞的贴壁,同时还具有抗胰酶活性。血清同时也是矿物质、脂类及激素的来源。最常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和马血清等。牛血清是按照采血时间的早晚来分类的。采血时间越早,营养物质越丰富,所含抗体也越少,因而胎牛血清适合要求高的细胞系和克隆化培养。
而血清批次间的差别就是不可避免的,这种差异来源于不同的制备方法和除菌方法、动物的年龄差别及血清的储存条件等,而且与取血动物的来源关系密切。不同的牧场、不同的气候天气及其他环境因素都可能影响血清的质量。因此选好了一种血清就要尽可能长期使用它。在需要更换时,也要尽量保持与原有的一批血清相似。现在很多公司都提供血清预留,你一旦选定了某个批次的血清,最好备足一年的量,这样可以避免很多麻烦。
血清固然是细胞培养中不可或缺的成分,但血清的批间差异大,更换血清时需要做大量的测试以取保替换的血清与原来的相似。而血清的供应也是必须要考虑的因素。
无血清培养基(Serum-Free Media),通常以SFM表示,顾名思义,就是在细胞培养中不需要添加血清,但是在某些应用中可能要添加生长因子或细胞因子。无血清培养基中添加了血清的主要成分:粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等,能减少上述血清带来的不利因素,使细胞培养的条件更稳定。但它也不是完美的,从有血清培养过渡到无血清培养的条件并不像想象中那么直截了当。处于发育的不同分化阶段的细胞(例如干细胞与定向前体细胞相比)需要不同的配方,对生长因子和细胞因子的选择尤为重要。而且在去除血清的同时,也去除了一些血清蛋白具有的保护、解毒作用,因此对试剂、水的纯度和仪器清洁度的要求更高。另外,它的价格也比普通的培养基贵很多。
这么多种,要选择起来也是个头疼的事情。除了部分培养基是公开配方的,如用于培养内皮细胞的MCDB 131(Sigma),大部分液体培养基都是专利配方的,也就是说其中的成分是保密的。那么你只能是检索文献、让供应商推荐,然后用自己的细胞做几次传代培养来选出最合适的培养基。毕竟实践出真知嘛。
2、免疫组化中一抗与二抗有什么要求?谢谢!
比如一抗是鼠抗人,二抗必须是×抗鼠的。×表示可以是羊,兔,马等。一抗是单抗,二抗是多抗,是抗一类同种异型的Ig,带有特殊的可产生发光现象的标记。
条件允许尽量选择进口,一抗abcam,Santa,CST等值得信赖,二抗的话国产的就行了。
源性一抗如果需要做共定位,那么就需要不同源性的且要能够用于人组织的,可以做组化的,二抗建议选择驴抗,这样用处多;如果说是做组织化学,那么一抗源性就无所谓了只要能用于人的组织,二抗相应配套就行。
(2)进口马血清扩展资料:
抗体选择没问题,关于二抗你直接购买国产的二抗试剂盒就可以了,如中杉金桥或者博士德的都没问题,里面封闭用的过氧化氢和山羊血清都有的。按照试剂盒说明,一步一步做即可。
免疫荧光,ABC,western blotting一抗应该可以通用,
某些抗体的说明书上会给推荐效价,有时会同时给出western blotting 和免疫组化的效价。
一点更正:
免疫荧光就是一种免疫组化方法!免疫荧光使用的是荧光抗体(荧光一抗为直接法,普通一抗加荧光二抗为间接法)。
免疫组化的二抗必须是抗一抗物种的抗原,比如说:做A动物的B蛋白所用的一抗为动物C抗动物A的B蛋白抗体,二抗就应该是动物D抗动物C抗体。
如:豚鼠抗大鼠cofilin1一抗,羊抗豚鼠二抗。二抗远比一抗便宜。
3、不小心割破的手,需要打破伤风?
被划伤时,一定要打破伤风疫苗吗?
破伤风是一种由破伤风杆菌侵入人体伤口而导致的急性感染性疾病,病死率约为20%~40%。一般而言,患者感染破伤风杆菌5~10日后,可出现肌肉持续性收缩等症状。病情严重者,会引起呼吸麻痹导致死亡。
医生指出:对于生活中常见的划伤、刺伤等,是否需要打破伤风针预防感染,还需根据患者的伤口深度和导致患者受伤的物体判断。
1、浅表创口:单纯的表面擦伤,经及时的清创处理后,通常不会出现破伤风感染,一般没有必要再打破伤风针预防。
2、污染较严重、较深的创口:当伤口深到需要缝针,或受到一些比较严重的外伤时,如钉子、刺、木头等尖锐物质的刺伤、扎伤,导致出血,这样的伤口又深又细,易感破伤风杆菌。
3、缺氧环境:伤口外口较小,伤口内有坏死组织、血块充塞或填塞过紧、局部缺血等,形成了一个缺氧环境,常致破伤风杆菌更易生长繁殖。
注射破伤风疫苗需要注意的几点
破伤风感染后一般不会直接发病,有7天左右的潜伏期,少数患者2天就会发病,潜伏期越短,症状越重,预后越差,死亡率越高。所以,破伤风重在预防,除了及时清理创口外,必要时一定要及时注射破伤风抗毒素疫苗。
1、打破伤风抗毒素要做过敏试验:破伤风抗毒素是一种免疫马血清,对人体是一种异性蛋白,具有抗原性,可能引起过敏反应及其他不良反应,因此在用药前应先做过敏试验。
2、外伤后需及时注射:破伤风感染后发病的潜伏期多数为1~2周。根据其发病机制,伤后24小时之内或稍晚应用破伤风抗毒素才能起到预防作用,临床上强调应尽早应用。
3、被动免疫与主动免疫:一般而言,被动免疫带来的抗体对身体的保护作用只能持续2~3周。所以说,应用一次破伤风抗毒素或破伤风免疫球蛋白,无法带来永久的免疫力。而要形成更持久的免疫力,需要依靠按时接种破伤风类毒素疫苗在体内产生的主动免疫。
4、什么是生物制品,包括有哪些?
生物制品是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的,用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。
生物制品不同于一般医用药品,它是通过刺激机体免疫系统,产生免疫物质(如抗体)才发挥其功效,在人体内出现体液免疫、细胞免疫或细胞介导免疫。
生物制品包括:预防用生物制品、治疗用生物制品和诊断用生物制品三大类。临床上常用的有:人血白蛋白、人免疫球蛋白、流行性感冒病毒裂解疫苗、转移因子等等!
运输三原则:
①采用最快速的运输方法,缩短运输时间;
②一般应用冷链方法运输;
③运输时应注意防止制品冻结。
(4)进口马血清扩展资料:
入库验收:我国对疫苗类制品、血液制品、用于血源筛查的体外生物诊断试剂以及国家食品药品监督管理总局规定的其他生物制品实行批签发管理,每批制品出厂上市或者进口时进行强制性检验、审核的制度。
检验不合格或者审核不被批准者,不得上市或者进口,因此,入库验收时供货单位应提供批签发报告。
使用管理:调配生物制品须凭医师开具的处方或医嘱单,经药师审核合格后予以调配、复核、发放或配置。使用中密切观察药物不良反应。
管理规则
(一)基本生产条件生产生物制品的单位应有合乎微生物操作的实验室;应具备灭菌操作条件;有冷藏设施;应能对产品自检;生产应由主管技师以上职称者主持并做到文明生产;产品要符合国务院卫生行政部门制定的《生物制品规程》。
(二)管理权限与范围生物制品:统一由卫生部管理,由部直属的生物制品研究所生产。其它特殊需要的产品需由省卫生行政部门向卫生部报告审核批准后,方可生产。
血液制品:除卫生部属的生物制品研究所生产外,各省、自治区、直辖市也可生产,但只能有1~2个生产点,由省药检所监督检验产品质量。
其它医疗卫生单位不准生产生物制品及血液制品。个别因科研需要又无生产单位正常供应的品种,要具备一定条件,经省卫生行政部门同意方可研制,经检定机构同意,并报省卫生行政部门审核批准后,才能在一定范围内上人体试用,但是不得进一步中试投产。
(三)颁发营业执照卫生部所属的生物制品研究所生产的生物制品由国务院卫生行政部门和国家工商行政管理总局批准。省属的生物制品生产单位由省卫生行政部门会同省工商行政管理局审核批准后方可颁发营业执照。
(四)质量标准按卫生部一九七九年颁发的《生物制品规程》所规定的质量标准检验。
(五)生产、销售和储备卫生部属单位的生物制品的生产、销售、储备由卫生部统一平衡。省属血站的血液制剂生产、销售由省卫生厅安排。
(六)进口生物制品由卫生部检定所检验。血液制品由口岸药检所检验。中国血源充裕国外的AIDS病已四外蔓延,进口血液制品必须严格控制。
(七)价格的制定与调整由卫生部统一管理。新产品试销时,或参照同类产品自订,报卫生部备案,投产后再报卫生部批准。
(八)医院购进的生物制品的管理应严格按储备条件要求,预以储藏,按有效期先后使用。严格适应证,防止滥用。加强血液制品的监测,杜绝由于使用血液制品而传播的疾病。