1、什麼樣的進口血清最適合培養細胞?
血清的選擇:
血清含有生長因子可促進細胞的繁殖,含有附著因子可促進細胞的貼壁,同時還具有抗胰酶活性。血清同時也是礦物質、脂類及激素的來源。最常用的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和馬血清等。牛血清是按照采血時間的早晚來分類的。采血時間越早,營養物質越豐富,所含抗體也越少,因而胎牛血清適合要求高的細胞系和克隆化培養。
而血清批次間的差別就是不可避免的,這種差異來源於不同的制備方法和除菌方法、動物的年齡差別及血清的儲存條件等,而且與取血動物的來源關系密切。不同的牧場、不同的氣候天氣及其他環境因素都可能影響血清的質量。因此選好了一種血清就要盡可能長期使用它。在需要更換時,也要盡量保持與原有的一批血清相似。現在很多公司都提供血清預留,你一旦選定了某個批次的血清,最好備足一年的量,這樣可以避免很多麻煩。
血清固然是細胞培養中不可或缺的成分,但血清的批間差異大,更換血清時需要做大量的測試以取保替換的血清與原來的相似。而血清的供應也是必須要考慮的因素。
無血清培養基(Serum-Free Media),通常以SFM表示,顧名思義,就是在細胞培養中不需要添加血清,但是在某些應用中可能要添加生長因子或細胞因子。無血清培養基中添加了血清的主要成分:粘附因子、生長因子、必需的營養物質和激素等,能減少上述血清帶來的不利因素,使細胞培養的條件更穩定。但它也不是完美的,從有血清培養過渡到無血清培養的條件並不像想像中那麼直截了當。處於發育的不同分化階段的細胞(例如幹細胞與定向前體細胞相比)需要不同的配方,對生長因子和細胞因子的選擇尤為重要。而且在去除血清的同時,也去除了一些血清蛋白具有的保護、解毒作用,因此對試劑、水的純度和儀器清潔度的要求更高。另外,它的價格也比普通的培養基貴很多。
這么多種,要選擇起來也是個頭疼的事情。除了部分培養基是公開配方的,如用於培養內皮細胞的MCDB 131(Sigma),大部分液體培養基都是專利配方的,也就是說其中的成分是保密的。那麼你只能是檢索文獻、讓供應商推薦,然後用自己的細胞做幾次傳代培養來選出最合適的培養基。畢竟實踐出真知嘛。
2、免疫組化中一抗與二抗有什麼要求?謝謝!
比如一抗是鼠抗人,二抗必須是×抗鼠的。×表示可以是羊,兔,馬等。一抗是單抗,二抗是多抗,是抗一類同種異型的Ig,帶有特殊的可產生發光現象的標記。
條件允許盡量選擇進口,一抗abcam,Santa,CST等值得信賴,二抗的話國產的就行了。
源性一抗如果需要做共定位,那麼就需要不同源性的且要能夠用於人組織的,可以做組化的,二抗建議選擇驢抗,這樣用處多;如果說是做組織化學,那麼一抗源性就無所謂了只要能用於人的組織,二抗相應配套就行。
(2)進口馬血清擴展資料:
抗體選擇沒問題,關於二抗你直接購買國產的二抗試劑盒就可以了,如中杉金橋或者博士德的都沒問題,裡面封閉用的過氧化氫和山羊血清都有的。按照試劑盒說明,一步一步做即可。
免疫熒光,ABC,western blotting一抗應該可以通用,
某些抗體的說明書上會給推薦效價,有時會同時給出western blotting 和免疫組化的效價。
一點更正:
免疫熒光就是一種免疫組化方法!免疫熒光使用的是熒光抗體(熒光一抗為直接法,普通一抗加熒光二抗為間接法)。
免疫組化的二抗必須是抗一抗物種的抗原,比如說:做A動物的B蛋白所用的一抗為動物C抗動物A的B蛋白抗體,二抗就應該是動物D抗動物C抗體。
如:豚鼠抗大鼠cofilin1一抗,羊抗豚鼠二抗。二抗遠比一抗便宜。
3、不小心割破的手,需要打破傷風?
被劃傷時,一定要打破傷風疫苗嗎?
破傷風是一種由破傷風桿菌侵入人體傷口而導致的急性感染性疾病,病死率約為20%~40%。一般而言,患者感染破傷風桿菌5~10日後,可出現肌肉持續性收縮等症狀。病情嚴重者,會引起呼吸麻痹導致死亡。
醫生指出:對於生活中常見的劃傷、刺傷等,是否需要打破傷風針預防感染,還需根據患者的傷口深度和導致患者受傷的物體判斷。
1、淺表創口:單純的表面擦傷,經及時的清創處理後,通常不會出現破傷風感染,一般沒有必要再打破傷風針預防。
2、污染較嚴重、較深的創口:當傷口深到需要縫針,或受到一些比較嚴重的外傷時,如釘子、刺、木頭等尖銳物質的刺傷、扎傷,導致出血,這樣的傷口又深又細,易感破傷風桿菌。
3、缺氧環境:傷口外口較小,傷口內有壞死組織、血塊充塞或填塞過緊、局部缺血等,形成了一個缺氧環境,常致破傷風桿菌更易生長繁殖。
注射破傷風疫苗需要注意的幾點
破傷風感染後一般不會直接發病,有7天左右的潛伏期,少數患者2天就會發病,潛伏期越短,症狀越重,預後越差,死亡率越高。所以,破傷風重在預防,除了及時清理創口外,必要時一定要及時注射破傷風抗毒素疫苗。
1、打破傷風抗毒素要做過敏試驗:破傷風抗毒素是一種免疫馬血清,對人體是一種異性蛋白,具有抗原性,可能引起過敏反應及其他不良反應,因此在用葯前應先做過敏試驗。
2、外傷後需及時注射:破傷風感染後發病的潛伏期多數為1~2周。根據其發病機制,傷後24小時之內或稍晚應用破傷風抗毒素才能起到預防作用,臨床上強調應盡早應用。
3、被動免疫與主動免疫:一般而言,被動免疫帶來的抗體對身體的保護作用只能持續2~3周。所以說,應用一次破傷風抗毒素或破傷風免疫球蛋白,無法帶來永久的免疫力。而要形成更持久的免疫力,需要依靠按時接種破傷風類毒素疫苗在體內產生的主動免疫。
4、什麼是生物製品,包括有哪些?
生物製品是應用普通的或以基因工程、細胞工程、蛋白質工程、發酵工程等生物技術獲得的微生物、細胞及各種動物和人源的組織和液體等生物材料制備的,用於人類疾病預防、治療和診斷的葯品。
生物製品不同於一般醫用葯品,它是通過刺激機體免疫系統,產生免疫物質(如抗體)才發揮其功效,在人體內出現體液免疫、細胞免疫或細胞介導免疫。
生物製品包括:預防用生物製品、治療用生物製品和診斷用生物製品三大類。臨床上常用的有:人血白蛋白、人免疫球蛋白、流行性感冒病毒裂解疫苗、轉移因子等等!
運輸三原則:
①採用最快速的運輸方法,縮短運輸時間;
②一般應用冷鏈方法運輸;
③運輸時應注意防止製品凍結。
(4)進口馬血清擴展資料:
入庫驗收:我國對疫苗類製品、血液製品、用於血源篩查的體外生物診斷試劑以及國家食品葯品監督管理總局規定的其他生物製品實行批簽發管理,每批製品出廠上市或者進口時進行強制性檢驗、審核的制度。
檢驗不合格或者審核不被批准者,不得上市或者進口,因此,入庫驗收時供貨單位應提供批簽發報告。
使用管理:調配生物製品須憑醫師開具的處方或醫囑單,經葯師審核合格後予以調配、復核、發放或配置。使用中密切觀察葯物不良反應。
管理規則
(一)基本生產條件生產生物製品的單位應有合乎微生物操作的實驗室;應具備滅菌操作條件;有冷藏設施;應能對產品自檢;生產應由主管技師以上職稱者主持並做到文明生產;產品要符合國務院衛生行政部門制定的《生物製品規程》。
(二)管理許可權與范圍生物製品:統一由衛生部管理,由部直屬的生物製品研究所生產。其它特殊需要的產品需由省衛生行政部門向衛生部報告審核批准後,方可生產。
血液製品:除衛生部屬的生物製品研究所生產外,各省、自治區、直轄市也可生產,但只能有1~2個生產點,由省葯檢所監督檢驗產品質量。
其它醫療衛生單位不準生產生物製品及血液製品。個別因科研需要又無生產單位正常供應的品種,要具備一定條件,經省衛生行政部門同意方可研製,經檢定機構同意,並報省衛生行政部門審核批准後,才能在一定范圍內上人體試用,但是不得進一步中試投產。
(三)頒發營業執照衛生部所屬的生物製品研究所生產的生物製品由國務院衛生行政部門和國家工商行政管理總局批准。省屬的生物製品生產單位由省衛生行政部門會同省工商行政管理局審核批准後方可頒發營業執照。
(四)質量標准按衛生部一九七九年頒發的《生物製品規程》所規定的質量標准檢驗。
(五)生產、銷售和儲備衛生部屬單位的生物製品的生產、銷售、儲備由衛生部統一平衡。省屬血站的血液制劑生產、銷售由省衛生廳安排。
(六)進口生物製品由衛生部檢定所檢驗。血液製品由口岸葯檢所檢驗。中國血源充裕國外的AIDS病已四外蔓延,進口血液製品必須嚴格控制。
(七)價格的制定與調整由衛生部統一管理。新產品試銷時,或參照同類產品自訂,報衛生部備案,投產後再報衛生部批准。
(八)醫院購進的生物製品的管理應嚴格按儲備條件要求,預以儲藏,按有效期先後使用。嚴格適應證,防止濫用。加強血液製品的監測,杜絕由於使用血液製品而傳播的疾病。