1、我現在要做熒光定量PCR，有3個目的基因，以ACTIN基因作為內參，分析其在根莖、根、莖、葉的表達情況，
如果你的實驗設計中有陰性和陽性對照或者是要做組間對比，就做半定量，因為即使你做了全定量，最後需要對比的時候也回到了相對關系的倍比值，只不過繞了一大圈。
半定量比較簡單
不需要做標准曲線，做標准曲線又要浪費24個孔，如果你是用96孔的話
看你的描述，應該是4個分組，做3個目的基因允許有6個復孔
或者減少復孔量每個目的基因設計2-3個引物，因為引物很便宜，選擇溶解曲線最好的做。
開始做都會出現復孔不穩定的情況，做幾次操作熟練了復孔數值穩定之後就可以不用復孔了，直接把組內樣本一個個上上去。
關於數據分析，實時熒光定量PCR儀會自帶分析軟體，設置好對照模笑物和內參，如果有同組樣本還需要設置biological group，然後選擇樣本點分析按鈕一切OK
哦 還要補充一點，槍，槍頭，八升源聯管，EP管一定要用進口的，否則掛壁的試劑的價值遠遠超過進口耗材的價值，更旦液關鍵的是浪費樣本原料和時間。
2、什麼是EP管 有哪些材質 和BA管相比，質量好在哪裡，
EP管也稱電化學拋光管。是對BA管進一步加工獲得。內表面光潔度Ra0.2μm。進口品牌有美國、日本、韓國等，國內品牌有泊松Poisson®。
3、有誰能詳細說一下全基因組Bisulfite Sequencing的流程
亞硫酸氫鈉測序法(bisulfite genomic sequencing)
直接測序法是建立在MSP基礎上進一步深入研究CpG島各個位點甲基化情況的方法。重亞硫酸鹽使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，行PCR擴增(引物設計時盡量避免有CpG，以免受甲基化因素的影響)所需片段，則尿嘧啶全部轉化成胸腺嘧啶。最後，對PCR產物進行測序，並且與未經處理的序列比較，判斷是否CpG位點發生甲基化。此方法一種可靠性及精確度很高的方法，能明確目的片段中每一個CpG位點的甲基化狀態。在尋找有意義的關鍵性CpG位點上，有其他方法無法比擬的優點。測序法以CpG島兩側不含CpG點的一段序列為引物配對區，所以能夠同時擴增出甲基化和非甲基化靶序列。它的不足是耗費時間和耗資過多，至少要測序10個以上的克隆才能獲得可靠數據，需要大量的克隆及質粒提取測序，過程較為繁瑣、昂貴。
第一部分 基因組DNA的提取。
這一步沒有懸念，完全可以購買供細胞或組織使用的DNA提取試劑盒，如果實驗室條件成熟，自己配試劑提取完全可以。DNA比較穩定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因組DNA應該是完整的。
此步重點在於DNA的純度，即減少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取過程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除兩者。
使用兩者的細節：
1：蛋白酶K可以使用滅菌雙蒸水配製成20mg/ml；
2：RNA酶必須要配製成不含DNA酶的RNA酶，即在購買市售RNA酶後進行再處理，配製成10mg/ml。否則可能的後果是不僅沒有RNA，連DNA也被消化了。兩者均於-20度保存。
驗證提取DNA的純度的方法有二：
1：紫外分光光度計計算OD比值；
2：1%-1.5%的瓊脂糖凝膠電泳。
我傾向於第二種方法，這種方法完全可以明確所提基因組DNA的純度，並根據Marker的上樣量估計其濃度，以用於下一步的修飾。
第二部分 亞硫酸氫鈉修飾基因組DNA
如不特別指出，所用雙蒸水（DDW）均經高壓蒸汽滅菌。
1：將約2ugDNA於1.5mlEP管中使用DDW稀釋至50ul；
2：加5.5ul新鮮配製的3M NaOH；
3： 42℃水浴30min；
水浴期間配製：
4：10mM對苯二酚（氫醌），加30ul至上述水浴後混合液中；（溶液變成淡黃色）
5： 3.6M亞硫酸氫鈉（Sigma，S9000），配製方法：1.88g亞硫酸氫鈉使用DDW稀釋，並以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0，最終體積為5ml。這么大濃度的亞硫酸氫鈉很難溶，但加入NaOH後會慢慢溶解，需要有耐心。PH一定要准確為5.0。加520ul至上述水浴後溶液中。
6：EP管外裹以鋁箔紙，避光，輕柔顛倒混勻溶液。
7：加200 ul 石蠟油，防止水分蒸發，限制氧化。
8：50℃避光水浴16h。
一般此步在4pm開始做，熟練的話不到5pm即可完成，水浴16h正好至次日8am以後收，時間上很合適。
這一步細節：
1：基因組DNA的量不需十分精確，寧多勿少，因為在以後純化回收步驟中會有丟失，且此方法修飾最多可至4ug。
2：所有試劑均須新鮮配製，所以配液的技術要過關，既要快，又要精確。
3：亞硫酸氫鈉溶液呈強酸性，一定用鹼將PH調制5.0，否則PH不合適會影響後續純化吸收。
4：水浴最好達16小時，雖可以短至8小時，但後者修飾會有不完全。
第三部分 修飾後DNA純化回收
EP管如無特別說明均為高壓蒸汽滅菌的。
1. 將移液器槍頭伸入石蠟油層下，先輕輕加壓使其中一小段石蠟油排出，然後吸取混合液至一潔凈1.5mlEP管中。
2：以下使用Promega Wizard Cleanup DNA純化回收系統（Promega，A7280）
1）70℃水浴預熱DDW；配製80%異丙醇；
2）加1ml Promega』s Wizard DNA Clean-up resin，輕柔顛倒混勻，使DNA充分與樹脂結合；
3）由於該試劑盒中僅配備針筒沒有針栓，如果有真空負壓吸引器，使用起來很方便；如果沒有，需要自備3ml-5ml注射器。將注射器針筒與試劑盒提供的回收小柱緊密連接後，將上述混合物用移液器移至針筒內，用2ml以上的EP管放置小柱下接收廢液。加針栓，輕輕加壓，將液體擠出，此時可見小柱內有白色的樹脂沉積。
4）將注射器與小柱分離後拔出針栓，再將針筒與小柱連接，向針筒內加入2ml 80％的異丙醇，插入針栓，輕輕加壓，將異丙醇擠出。此為洗滌步驟。
5）將注射器與小柱分離，將小柱置於潔凈1.5ml潔凈EP管上，離心12000rpm，2min，以甩去殘余異丙醇成分，使樹脂乾燥。此時，修飾後DNA處於與樹脂結合狀態。
6）將小柱取下置於另一潔凈1.5mlEP管上，移液器加50ul預熱好的DDW，室溫放置5min。
7）離心12000rpm，20s，此為洗脫步驟，此時EP管內液體即為洗脫的修飾後DNA溶液，終體積為50ul。
3：加5.5ul 新鮮配製的3M NaOH，室溫放置15min。
4：加33ul 10M乙酸銨，以中和NaOH，使溶液PH於7.0左右。
5：加4ul 10mg/ml糖原，此作為沉澱指示劑，因為其與乙醇混合後可產生沉澱，便於以後離心後辨別回收物的位置，以防在吸取殘余乙醇時將回收物吸走。其實，加入這些糖原究竟能起多大作用，不好說。不過有國產糖原賣，包裝不大，也很便宜，買來一用，算嚴格遵守文獻的步驟吧。
6：加270ul 冰無水乙醇，置於-20度，過夜沉澱。有人為沉澱最短可至2小時，但我認為時間長些可能會更好。並且做到此步驟時，一般會到中午，如果樣本多的話要到下午，不妨放置過夜，日程可以輕鬆些，順便做些其他試驗。如果想當天做完，沒有問題，但我認為最好多沉澱些時候，至少6小時吧（這是經驗，我做過最少6小時，也是可以的，再短就不敢發表意見了）
7：4度，12000rpm離心，30min，倒去上清液，收集沉澱。不必吸凈。
8：加500ul 70%乙醇，不要將沉澱吹打起來，只要把乙醇加上即可。輕柔傾斜EP管，旋轉一圈，再次離心，4度12000rpm，5min。離心後倒掉上清，再加同量乙醇，同樣再做一遍。此為洗滌步驟，共2次。
9：倒掉上清，並常溫簡短離心後，將附壁乙醇離至EP管底，移液器小心將殘余液體吸凈，室溫乾燥5min，或沉澱由不透明變為半透明或透明時，加入20ul- 30ulDDW，溶解沉澱。至此，已完成了修飾後DNA的純化回收，所得為修飾後DNA溶液，可用於此後的進一步實驗。
10：-20℃保存DNA溶液。
此步細節：
1：在使用注射器時，一定要用力均勻且輕，如使用暴力，會將小柱內的薄膜擠破，失去作用。
2：乙酸銨、糖原不需新鮮配製，糖原配好後放在-20度保存，乙酸銨室溫即可，因為這樣濃度的乙酸銨非常難溶，一旦放在4度，取出用時也會有很多溶質析出。
3：異丙醇、70%乙醇都不需要新鮮配製，但如果用量大，現場配也很方便。
此步關鍵是在樹脂與DNA的結合上，這就再次強調第二部分調亞硫酸鈉PH值得重要性。因為樹脂與DNA結合需要有一個適當的PH，如前一步沒做好，此步樹脂不能與DNA很好結合，將會帶來災難性後果，即DNA隨著液體被擠出了，洗脫時實際已沒有任何DNA了。
第四部分 修飾後DNA用於PCR
這一步也沒有懸念。我主要談一下這裡面的幾個比較棘手的問題：
1：引物問題：我感覺自己設計引物有相當的難度，我曾設計過幾對引物，並且試驗了一下，但以失敗告終。如果時間充裕、作的又是比較新的基因文獻不多，自己設計引物沒有問題。如果不是這樣，還是參考文獻更好些。首先查閱SCI分值高的文獻，然後是著名實驗室的文獻，如果國內有做的，更好了，可以直接聯系咨詢。查到序列後，一定要和Genbank中的序列進行比對，防止有印刷錯誤造成的個別鹼基的差別。然後再到google上搜一下，看用的人多否，體系條件是否一樣。用的人多、體系條件一樣，表明可重復性比較強。我也是按此行事，算比較順利。
2：Taq酶問題：有文獻用高保真的金牌 Taq（Platinum），但我感覺只要體系正確、變性退火等條件合適，一般的熱啟動酶是可以的。我開始使用的是Takara的LA Taq，很好用，配有10x含mg++的LA緩沖液。有時候用沒了，暫時以Takara 的普通Taq酶也可以。如何選擇，可以根據自己的情況。初作者還是用好一點的酶。
3：PCR的條件：變性一般都選擇95度，3min。其餘我感覺還是根據文獻，退火可以根據你的引物的退火溫度在小范圍內嘗試。一般和文獻報道差別不大。只是擴增片斷特異性的問題。建議根據文獻。
4：做PCR的EP管最好選擇進口的，壁薄且厚度均勻，這可以保證溫度的迅速變化可以及時傳遞給管內的反應液，使體系真正在所設定的溫度下運行。
5：PCR儀：如果在某一個儀器上作出來了，最好一直用此儀器繼續。不同的儀器「脾氣」也不一樣，但EP管必要和儀器內的插孔緊密結合方好，留有空隙，我認為會影響溫度的傳遞。
這一部分有些啰嗦，只是個人一些不成熟經驗。有疑問處，請大家指出，交流。今天先到這里，現寫一些內容，比較費勁，總是不能一揮而就。望見諒。歇息一會准備寫最後藍白斑篩選克隆這一部分。
第五部分 PCR產物的凝膠回收
這一步比較簡單，可以購買一個凝膠PCR產物回收試劑盒，國產的就很好、價格也合理，比如TIANGEN的產品（用過）。把切下來的膠按說明書操作即可。
幾個細節：
1：PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳，要使用新配的電泳液。凝膠濃度1%-2%均可。
2：凝膠DNA回收時在300nm紫外燈下觀察條帶位置，切取目的片斷所在位置的凝膠，盡量小，保證特異性。
3：紫外照射時間不能過長，否則對DNA有損傷。
4：回收後的DNA如不馬上用就儲存於-20度，在數月內是很穩定的。
第六部分 PCR產物與T載體的連接和轉化、藍白斑篩選
1：連接T載體（本實驗使用的是Promega的試劑盒）
15ul體系
T-easy 1ul
Ligase 1ul
2xbuffer 7.5ul
DNA 5.5ul
4度，過夜。
2：連接產物的轉化
1）-70度冰箱內取出感受態細菌，融化後置於冰上；
2）連接產物15ul 全部加入，至於冰上30分鍾；
3）42度， 90秒鍾；
4）冰上2分鍾；
5）800ul LB培養基；
6）280rpm，37度，搖床45分鍾（將管放水平了搖，保證菌液搖勻）；
7）8000rpm，1分鍾；在超凈台內去上清，留100-150ul；
8）塗板：37度孵箱過夜；（板為含有氨苄青黴素的固體LB培養基）
先塗：X-gar 35ul
IPTG 25ul
後塗：混懸液
過夜後可見板上長出很多藍色或白色斑點，取白色斑點，尤其是藍色斑點周圍的白色斑點，此處自聯率較低。
3：取白斑，劃種於新板上
新板：先塗：X-gar 35ul
IPTG 25ul
然後於板底劃出分區，進行標記。根據需要，一般一板作50個克隆沒有問題。
針頭挑白斑劃2道於板上相應區域內。
37度，孵箱過夜。
4：聯系測序公司送測序。一般一個克隆在35-45元。
這一部分的細節：
1：塗板要均勻，保證Xgar和IPTG均勻分布在板面上；
2：不要讓藍白斑長得太滿，否則選取克隆時容易一下挑2個。
4、塑料400多度的放熱峰是什麼峰
塑料400多度的放熱峰是塑料峰。
塑料峰是指譜圖中顯示的相差44Da，並規律呈現的峰，它是一類雜質峰的統稱，會掩蓋低豐度蛋白的峰，造成鑒定蛋白不全且數據具有偏性。這些
塑料峰可能是Triton X-100（去垢劑）的峰，也可能是EP管等塑料器皿內壁派首鍵滲濾出的polymer（-CH2CHOH-）的峰。因此，我芹旅們建議在樣品制備過程中不可採用含有Triton X-100等去垢劑的試劑，需帶無粉乳膠手套，在玻璃板上塵巧進行切割膠條的工作，並用高質量的進口EP管盛裝樣品。
5、eppendorf管和凍存管是一種東西嗎？
子彈頭。。。做過實驗的都該用過啊，因為形似子彈，一種小型離心管而已，如果沒記錯，是1.5ml的ep管則是比較大的圓筒狀離心管，可以直接放在離心機上使用
6、實驗技能方面
典型的PCR包括 高溫變性、低溫退火、中溫延伸 三個步驟，通過將這一套過程不斷循環，使DNA得以成百萬倍的擴增。
因此 所謂的PCR儀，其實就是一套自動溫控系統
我們可以看到這里復制之後實際上有一條鏈是新合成的，另一條則是原先就存在的，因此說這叫半保留復制。
1.模板（1 ng/μL）
模板DNA可以從各種生物組織中得到，通常濃度為1 ng/μL。濃度不是越高越好，濃度太高會導致大量的非特異性結合。
2.引物（10 μmol/L）
引物濃度通常是10 μmol/L。
引物濃度太低，產量較低；
引物濃度太高，引起錯配、非特異性以及引物二聚體。
3.Taq酶（5 U/μL）
U是酶活力單位，定義為：25℃下（其它為最適條件），1分鍾內能轉化1 μmol底物的酶含量，或是轉化底物中1 μmol有關基團的酶含量。
4.dNTP（2.5 mmol/L）
dNTP可與Mg2+結合，使游離的Mg2+濃度下降，從而影響DNA聚合酶的活性。
5.Buffer（含Mg2+）
Mg2+是DNA聚合酶的激活劑。
Mg2+濃度過低會使DNA聚合酶活性降低，PCR產量下降。
Mg2+濃度過高會使特異性降低。
對反應產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測
Real-time qPCR是指在PCR反應中加入熒光基團，通過連續監測熒光信號出現的先後順序以及信號強弱的變化，即時分析目的基因的初始量，該技術的發明實現了PCR從定性到定量的飛躍。
保存於進口EP管，300u 一個
封裝前充分震盪保存液
要分別准備fluA和fluB的體系
流式細胞儀，樣品細胞和熒光染料是流式細胞術的三大要素
流式細胞術檢測的對象是呈獨立狀態懸浮於液體中的細胞，不能直接檢測組織塊中的細胞，必須先用各種方法將臟器或者組織制備成為單細胞懸液，然後標記上熒光素偶聯抗體，才能夠被流式細胞儀檢測。
流式細胞術應用領域極其廣泛，特別是免疫學，臨床醫學［3-6］，現在流式細胞術還能夠輔助多種疾病的這段，尤其是白血病的診斷和分型。
流式細胞儀是對細胞進行自動分析和分選的裝置。它可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特徵參量，並可以根據預選的參量范圍把指定的細胞亞群從中分選出來。
各種型號的流式細胞儀雖橋慎握然差別較大，但是基本結構是相同的，一般分為:液流系統，光路系統，檢測系統和分選系統［7］。分析型流式細胞儀主要由前面的三個系統組成，分選型流式細胞儀比分析型細胞儀多了一個分選系統。
液流系統由兩套緊密聯系而又相互獨立的液流組成，即鞘液流和樣品流。鞘液流從鞘液筒開始，通過管道進入噴嘴，經噴嘴的小孔形成穩定的可見的液流。鞘液最基本的特徵就是等滲，保證處於鞘液中的細胞不會因為低滲或者高滲而死亡。樣品流是上樣分析的含有樣品細胞的液體流，樣品流開始於樣品管，經過特定的專門管道進入噴嘴，然後與鞘液一起從噴嘴口射出形成可見液流，最後經過廢液孔流入廢液桶。上樣分析時，兩種液體雖然互相接觸，卻沒有互相混合在一起，而是形成層流，樣品流在中間，鞘液流在外圍，而且兩者所受的壓力也不一樣。操作者可以通過調節樣品正壓和鞘液正壓之差來控制上樣的速度，樣品的正壓和鞘液正壓之差越大，可見液流中樣品流的直徑就越大。上樣分析的速度就越大。
光路系統開始於激光器，激光器是流式細胞儀的必需組成元件之一，不同的激光器發出的激光照射到細胞之後產生的光信號會經過不同的光路系統被不同的通道接收，流式細胞儀需要通過光路系統，根據不同的接收通道接收，然後通過信號的強弱間接反映細胞的孝春物理化學特性。
光路系統是由一系列的透鏡，濾光片和小孔組成，根據波長的不同分離各種光信號，其中濾光片尤敏慶其重要。根據功能的不同，可以分為長通濾片，短通濾片和帶通濾片三種。長通濾片功能為:波長大於特定波長的光可以通過，波長小於該波長的光被反射。短通濾片的波長小於特定波長的光可以通過，波長大於該波長的光被反射。帶通濾片的功能為:波長在某特定范圍的光可以通過，波長在該范圍以外的光被反射。
利用不同的類型的濾光片，將混合光信號分為六個不同的光信號，進入不同的六個通道，分別為SSC通道，FIFC通道，PE通道，PE-TxRed通道，PE-Cy5通道和PE-Cy7通道。
流式細胞儀的檢測分析系統就是以通道為單位將細胞的各個通道的光信號匯總分析，最後得出的樣品群體中細胞的物理化學特徵。這里必須提到光電倍增管的概念。通過濾光片根據波長的不同分離的光信號最後進入各自呢通道，也就是各自的光電倍增管。光電倍增管的功能主要為:將光信號轉變為電信號，同時通過一定的比例將信號放大。
流式細胞儀的通道根據光信號性質的不同可以分為散射光和熒光通道。散射光通道是接收散射光的通道，即前向角散射光（FSC）通道和側向角散射光（SSC）通道。熒光通道的命名方式是該通道主要接收哪個熒光素的熒光，就根據該熒光素的名稱來命名。例如FITC通道，接收488nm激光激發後的熒光信號，波長510-550nm的熒光信號，所以，當細胞被超級FITC偶聯抗體時，該通道所代表的信號就是FITC的信號，該通道接收的熒光信號越強，表示細胞上結合的FITC熒光素越多，為了方便，該通道被命名為FITC通道。此外，以主要熒光素命名的通道並不是只接收這一種熒光素被激發的熒光信號，其他的熒光素被激發後的熒光信號也可以被通道所接收和分析，如FITC通道，它也可以接收GFP和CFSE被488nm激光激發以後的熒光信號。
散射光信號和熒光信號經過光電倍增轉為電子信號後，是以電子脈沖和電子波的形式被計算機系統接收和分析的。電子波的比較大小主要有三種方式，即電子波的長度，寬度和面積。這三個參數都可以反映光信號的大小，但是參數面積代表電子波的大小要比長度和寬度更加准確。
分選式流式細胞儀比分析型流式細胞儀多一個系統，流式分選系統。分選型流式細胞儀能夠從樣品細胞中分離出目標細胞，回收後可以再培養，即，分選之後的細胞是具有活性的，無菌條件下的細胞。
檢測淋巴細胞亞群，監測細胞免疫狀態(淋巴細胞是機體免疫系統功能重要的大細胞群，在免疫應答過程中，末梢血淋巴細胞發育分化成為功能不同的亞群。當亞群的數量和功能發生異常時，就能導致機體免疫紊亂並產生病理變化［10-11］。FCM可以同時檢測一種或幾種淋巴細胞表面抗原，將不同的淋巴細胞亞群區分開來，並計算出它們相互間的比例，通過對病人淋巴細胞各亞群數量的測定來監控病人的免疫狀態，並指導治療)。
細胞周期分析:在細胞周期(G0，G1，S，G2，M)的各個時期，DNA的含量隨各時相呈現出周期性的變化［12］。通過核酸染料標記DNA，並由流式細胞儀進行分析，可以得到細胞各個時期的分布狀態，計算出G0/G1%，S%及G2/M%。了解細胞的周期分布及細胞的增殖活性。也可利用細胞周期蛋白(CYCLIN)、Ki67、核增殖抗原(PCNA)等，對細胞周期進行精確的分期：G0、G1、S、G2、M.應用於：腫瘤的早期診斷、腫瘤的良惡性判斷、觀察細胞的增殖狀態及周期分布和療效監測。
檢測細胞特異性標記物：FCM不但可以定性分析標記物，而且可以進行定量。用標記已知數量的熒光素分子的標准微球作參照，可以計算出每個細胞抗原定簇的個數。
7、50mlep管怎麼滅菌
50mlep管用蒸汽壓力法滅菌。
1、把50mlep管洗干凈，用雙蒸水沖洗3片，不蓋蓋。
2、用干凈的紙或無菌紗布包好，並脊放入高壓滅菌鍋中滅菌20min。50mlep管生物公司供應：絕運滲分光光度計，熒光定量PCR耗材，移液器吸嘴，微量離心管悄清，進口凍存管，細胞培養皿，培養板，培養瓶，吸頭，儀器及手套，色譜耗材，針頭過濾器。
8、ep管什麼材質
<
9、rna濃度50能進行逆轉錄嗎
為了准確地進行基因表達量分析，必須滿足只有cDNA作為模板檢出的先決條件，但Total RNA中常常混有基因組DNA，並可晌畢碼以直接作為PCR反應的模板進行擴增，因此會造成解析結果不準確。前面我們介紹數宴了細胞RNA的提取方法，在提取RNA之後，需要在逆轉錄酶的作用下將RNA逆轉錄生成cDNA,進而驗證基因的轉錄水平高低。

實驗前，由宴哪於RNA易降解，因此所有加樣槍頭以及EP管均選擇進口無RNA酶產品。
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首先將模板RNA在冰上解凍，斡旋振盪混勻，瞬時離心後，選用nanodrop進行RNA濃度測定。

打開電腦後，打開nanodrop軟體--點擊「Nucleic acid」--選擇「OK」--選擇「RNA」。
先用1ul滅菌dd H2O清洗3遍，擦乾。
加入樣品測定後，記錄數據，包括RNA濃度（<1000ng/μL）、260/280。
滅菌dd H2O清洗2-3遍，擦乾。
打開電腦後，打開nanodrop軟體--點擊「Nucleic acid」--選擇「OK」--選擇「RNA」。
先用1ul滅菌dd H2O清洗3遍，擦乾。
加入樣品測定後，記錄數據，包括RNA濃度（<1000ng/μL）、260/280。
滅菌dd H2O清洗2-3遍，擦乾。
一般來說230nm代表有機物水平(碳水化合物)，260nm代表RNA 水平，280nm代表蛋白水平，260/230 表示有機物量，260/280代表RNA提取量。